Paano makilala ang isang bacterium

Nilalaman

• yugto
• Pamamaraan 1 Kilalanin ang isang bacterium ng Gram stain
• Pamamaraan 2 Isagawa ang Ziehl-Neelsen Staining Test
• Pamamaraan 3 Pag-aralan ang pag-uugali at hitsura ng bakterya
• Pamamaraan 4 I-interpret ang lahat ng mga resulta

Sa artikulong ito: Kilalanin ang isang bakterya sa pamamagitan ng Gram staining Magsagawa ng Ziehl-Neelsen staining testStudy ang pag-uugali at hitsura ng bakteryaInterpretisyon ang lahat ng mga resulta43

Ang pagkakakilanlan ng bakterya ay isang kumplikadong gawain. Ang isa sa mga dahilan ay, ayon sa mga pagtatantya, mayroong sa pagitan ng 10 000 at 1 bilyong species ng bakterya sa mundo! Napakahalaga ng wastong pagkilala sa bakterya, lalo na sa larangan ng medikal, kung saan ang wastong paggamot ng isang sakit ay nakasalalay sa uri ng microbe na nagdudulot ng problema. Sa karamihan ng mga kaso, ang pagkilala ay ginagawa batay sa pag-aalis. Upang makilala ang isang bakterya, dapat kang magsagawa ng mga pagsusuri sa paglamlam, pag-aralan ang hitsura nito at pagmasdan kung paano ito tumutugon nang maayos sa iba't ibang mga kondisyon. Kung kailangan mo ng mabilis na resulta, kumuha ng isang sample ng DNA upang maipadala sa isang lab.

yugto

Pamamaraan 1 Kilalanin ang isang bacterium ng Gram stain

1. ipasiya kung ang bakterya ay Gram positibo o negatibo. Ang paglamlam ng Gram ay isang paraan ng paghati sa mga bakterya sa pagitan ng dalawang pinakakaraniwang uri: Gram positibo at negatibong Gram. Ang dating ay may isang makapal na pader ng cell na binubuo ng isang polimer na tinatawag na peptidoglycan, na may pinakamahusay na paglamlam bilang manipis na dingding ng Gram-negatibong bakterya.
   • Ang ilang mga karaniwang uri ng Gram-positibong bakterya ay ang streptococci, staphylococci, micrococci (o micrococci) at listeria.
   • Narito ang ilang karaniwang mga halimbawa ng Gram-negative bacteria: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium at Campylobacter.
2. Kumuha ng naaangkop na mga hakbang sa proteksyon. Ang mga bakterya at kemikal na elemento na gagamitin mo sa panahon ng pagsubok ay nagbibigay panganib sa iyong kalusugan. Magsuot ng goggles ng kaligtasan, itapon ang mga guwantes na nitrile at isang coat ng lab kapag nagsasagawa ng pagsusulit sa paglamlam. Kapag tapos ka na, ilagay ang mga guwantes at lahat ng iba pang mga kontaminadong materyales sa isang espesyal na bag. Tandaan na sundin ang mga pamamaraan ng iyong laboratoryo upang mapupuksa ang bag para sa mga kontaminadong produkto.
3. Ilagay ang sample upang obserbahan sa isang slide slide. Upang simulan ang pagsubok, maglagay ng isang pagbagsak o ispesimen ng bakterya sa isang sterile slide. Pagkatapos, i-slide ang talim sa ibabaw ng isang Bunsen burner na naiilaw nang tatlong beses upang ayusin ang sampol at pigilan ito mula sa paglabas ng plato kapag banlawan mo o idagdag ang mga reagents.
4. Magdagdag ng 5 patak ng lila na kristal sa talim. Ibuhos ang limang patak ng isang kristal na violet solution sa sample. Maghintay ng isang minuto para sa sample na sumipsip ng crystal violet.
   • Itago ang talim sa lugar na may mga pin ng damit upang hindi mo marumi ang iyong mga kamay.
5. Hugasan nang lubusan ang talim upang alisin ang mantsa. Gumamit ng isang gripo o isang pisil na bote at hayaang tumakbo ang tubig nang dahan-dahan nang hanggang limang segundo upang maalis ang mga nalalabi sa tinta na hindi sumunod sa sample.
6. Ibuhos ang limang patak ng isang Gram Diode Stain sa slide. Ito ay isang solusyon na binubuo ng diode, sodium bikarbonate at potassium diodide na nagiging sanhi ng pagkatunaw ng kristal na violet kasama ang mga pader ng cell ng bakterya. Ibuhos ang limang patak ng solusyon sa sample at iwanan sa loob ng isang minuto.
7. Hugasan ang sample na may alkohol o lactic acid. Ang alkohol at lacetone ay mga ahente ng pagpapaputi at aalisin ang paglamlam ng mga pader ng cell ng bakterya kung sila ay Gram-negatibo. Ibuhos ang ilang patak ng pagpapaputi sa sample at hayaan itong gumana nang hindi hihigit sa tatlong segundo. Pagkatapos nito, subukang banlawan nang marahan ng tubig sa loob ng limang segundo upang maalis ang mga ahente ng pagpapaputi na ito.
   • Kung pinapayagan mo ang pagpapaputi na gumana nang mahabang panahon, maaaring magresulta ito sa pagkawala ng Gram-positive bacteria na paglamlam, na nagreresulta sa isang maling negatibo.
8. Magsagawa ng isang kaibahan na pagsubok sa safranin. Ang Safranin ay isang pula na pangulay na kaiba sa kristal na lila, sa gayon ay kulayan ang bakterya na hindi naapektuhan ng lila na paglamlam. Ibuhos ang halos limang patak ng safranin sa sample at iwanan sa loob ng isang minuto. Pagkatapos nito, subukang banlawan nang marahan ng tubig sa loob ng limang segundo.
9. I-visualize ang iyong sample sa 1000X magnification. Ang bakterya ay magiging lilang o lila kung ito ay positibo ng Gram, o kulay-rosas kung ito ay negatibong Gram dahil sa safranin.

Pamamaraan 2 Isagawa ang Ziehl-Neelsen Staining Test

1. Gumamit ng diskarteng ito upang makita ang bakterya na mabilis. Ang mga species na ito ay naglalaman ng isang mas malaking halaga ng lipid, na ginagawang mas lumalaban sa mga tina na ginamit sa paglamlam ng Gram. Ang bakterya na lumalaban sa acid ay kabilang sa genus Mycobacterium, na kinabibilangan ng bakterya na responsable para sa tuberculosis (M. tuberculosis). Upang tinain ang isang bakterya na lumalaban sa acid, dapat kang gumamit ng isang pulang tinain na tinatawag na karboholohikal na fuchsin, lumalaban sa pagbubuhos ng mga solusyon sa acidic o sulfuric acid.
2. Kumuha ng naaangkop na mga hakbang sa proteksyon. Ang mga kemikal at biological na mga materyales na ginamit sa panahon ng Ziehl-Neelsen staining ay maaaring mapanganib. Bilang karagdagan, kakailanganin mo ring gumamit ng mga mapagkukunan ng init, tulad ng isang Bunsen nozzle, isang electric heater o isang lampara ng alkohol. Sundin ang mga tagubilin sa ibaba upang maisagawa ang pagsubok.
   • Ilagay sa salaming de kolor, guwantes na nitrile at isang coat coat.
   • Mag-ingat na huwag makahinga ng mga singaw mula sa mga tina at mga bleach at huwag hayaan ang mga patak na tumulo ang iyong mga mata o balat. Panatilihing bukas ang mga lalagyan sa ilalim ng isang talukbong.
   • Maging maingat kapag nagpainit ng talim. Karamihan sa mga kemikal na ginamit ay nasusunog. Maaaring mayroon ding mga bakas ng mga nasusunog na sangkap sa mga slide o iba pang kagamitan.
3. Ihanda ang talim. Sa pamamagitan ng mga pabilog na galaw, pantay na kumalat ang isang maliit na halaga ng sample ng bakterya sa gitna ng isang sterile slide. Ang iyong sample ay dapat na sakupin ang tungkol sa 10 mm sa 20 mm.
4. Patuyuin ang talim. Ilagay ang talim sa istraktura ng pagpapatayo gamit ang ispesimen na nakaharap sa paitaas. Hayaan itong matuyo nang natural sa loob ng 30 segundo. Huwag subukan na matuyo ang talim ng isang tela.
5. I-secure ang sample na may init. Sa pamamagitan ng ispesimen, i-slide ang talim ng dalawa o tatlong beses sa isang sinusunog na Bunsen burner. Maaari mo ring ilagay ang talim sa isang electric heater sa pamamagitan ng pagtatakda ng temperatura sa pagitan ng 65 ° C at 75 ° C nang hindi bababa sa dalawang oras. Mag-ingat na huwag pakuluan o sunugin ang halimbawang.
6. Idagdag ang carbolic fuchsin sa talim. Ibuhos ang ilang mga patak ng solusyon na ito sa slide. Ibuhos nang sapat upang ganap na masakop ang sampol.
7. Init ang talim upang ayusin ang pangulay. Mainit ang slide nang mabuti sa isang Bunsen burner o isang lampara ng alkohol, na may halimbawang nakadirekta pataas, o ilagay ito sa isang pampainit ng kuryente. Init ang talim sa 60 ° C o hanggang sa magsimula itong magpakawala ng singaw. Hayaang kumilos ang pangulay sa loob ng limang minuto.
   • Kung gumagamit ka ng electric heater, i-on ito sa 60 ° C. Kung pipiliin mo ang lampara ng alkohol o ang burner ng Bunsen, dapat mong asahan na makakita ng mga fume.
   • Upang mapanatili ang talim sa nais na temperatura sa loob ng limang minuto, magpainit nang paulit-ulit.
   • Mag-ingat na huwag pakuluan, sunugin o tuyo ang sample.
8. Banlawan ang talim ng malamig na tubig. Hayaan itong cool sa loob ng limang minuto at banlawan ng maramihang ilang segundo na may malinaw na tubig. Gumamit ng gripo ng tubig o isang pisngi ng bote upang matanggal ang mga mantsa ng pangulay na hindi sumunod sa sample.
9. Ibuhos sa sample acidic na alkohol o asupre acid. Gumamit ng isang dami ng 3% sa pamamagitan ng dami (v / v) alkohol o 20% sulfuric acid upang ganap na masakop ang halimbawang. Payagan ang acid na gumana hanggang sa mawala ang kulay at maabot ang isang maliwanag na kulay rosas na lilim. Ang proseso ay karaniwang tumatagal ng halos sampung minuto.
10. Gumamit ng malinis na tubig upang banlawan ang talim. Dahan-dahang hugasan ang talim sa ilalim ng isang gripo o gamit ang isang pisil na botelya. Alisin ang lahat ng mga nalalabi sa acid at dye.
11. Idagdag ang ahente ng kaibahan. Kapag nalinis mo ang slide, ibuhos sa dye ng malachite green o methylene blue. Ang dalawang solusyon na ito ay lumikha ng isang mala-bughaw o maberde na background kung saan ang pulang dye ay lilitaw, pati na rin ang iba pang mga biological na materyales, tulad ng mga cell ng tao at bakterya na hindi acid. Hayaan ang mga sangkap na gumana nang isa hanggang dalawang minuto.
12. Banlawan at tuyo ang talim. Banlawan nang lubusan ng tubig upang maalis ang labis na kaibahan. Kapag tapos ka na, tuyo ang likod ng talim ng isang tuyong tela at hayaan itong matuyo nang natural sa isang paninindigan.
13. I-visualize ang iyong sample sa 1000X magnification. Ang bakterya na lumalaban sa acid ay magiging pula o madilim na rosas. Ang iba pang mga bakterya, non-bacterial cells at ang base ng talim ay magiging berde o asul.

Pamamaraan 3 Pag-aralan ang pag-uugali at hitsura ng bakterya

1. Suriin ang hugis ng bakterya. Matapos maisagawa ang pagsubok sa paglamlam upang matukoy kung ang mga bakterya ay Gram-positibo, Gram-negatibo o lumalaban sa acid, oras na upang makilala ang mga species nang mas tumpak. Una, pag-aralan ang hugis ng bakterya sa slide. Ang tatlong pinaka-karaniwang mga form ay cocci (spherical), spirals at bacilli (rod form).
   • Mayroong maraming mga variant ng mga form na ito. Halimbawa, ang mga bilog na hugis bakterya (coccus), ay maaaring lumitaw sa mga pares (diplococci), sa mga tanikala, sa mga tambak o sa mga pangkat ng apat (tetrads).
2. Alamin kung ang bakterya ay aerobic o anaerobic. Kumuha ng dalawang halimbawa ng bakterya at lumikha ng dalawang magkahiwalay na kultura. Ang buwan ay dapat na anaerobic (lumago nang walang oxygen), habang ang iba pa ay dapat na aerobic (lumago ng oxygen). Itabi ang kultura ng anaerobic sa 35 ° C sa isang lugar na walang oxygen nang hindi bababa sa 48 oras bago obserbahan ang paglaki.
   • Kung ang bakterya ay lumalaki sa isang kapaligiran na walang oxygen, ngunit hindi kapag nakalantad sa oxygen, nangangahulugan ito na silaer ana.
   • Kahit na sila ay umuunlad sa isang oxygenated na kapaligiran, ngunit hindi sa kawalan ng oxygen, sila ay aerobic.
   • Kapag umuunlad ang mga ito sa parehong mga kapaligiran, pinag-uusapan namin ang tungkol sa mga bakterya na anaerobic na may talino.
3. Magsagawa ng isang motility test. Ang isang bakterya ay mobile kung maaari itong lumipat nang nag-iisa sa isa o higit pang mga flagella. Ang antas ng motility ay napakahalaga sa pagkilala ng ilang mga species ng bakterya. Mayroong maraming mga uri ng motility, ngunit ang pinakaligtas at pinaka-mabisang paraan ay ang semi-solid medium.
4. Lumikha ng isang kultura para sa pagsubok ng motility. Maghanda ng isang kultura ng bakterya sa sabaw ng kultura. Sundin ang mga tagubilin sa ibaba upang ihanda ang sabaw na iyong napili.
5. Inoculate ang kultura sa isang semi-solid agar para sa mga pagsusulit sa motility. Isang amerikana ang isang bahagi ng kultura ng sabaw na may isang karayom ​​ng inoculation karayom. Maingat na itanim ang karayom ​​sa semi-solid dagar tube, tulad ng TTC lagar, na inihanda mo para sa pagsubok. Ang karayom ​​ay dapat tumagos sa 2/3 ng agar.
   • Kapag tapos ka na, maingat na alisin ang karayom, mag-ingat na huwag lumampas sa mga limitasyon ng zone ng inoculation.
   • Isama ang tubo sa 30 ° C sa loob ng 48 oras.
6. Basahin ang resulta ng pagsubok. Ang agar para sa motility test ay magiging pula sa pakikipag-ugnay sa bakterya. Kung ang mga ito ay mobile, ang pula o pinkish tinge na ito ay kumakalat sa buong sangkap. Kung hindi man, ang paglamlam ay limitado sa site ng iniksyon.

Pamamaraan 4 I-interpret ang lahat ng mga resulta

1. Ipunin ang iyong mga puna. Upang malaman ang uri ng bakterya, kakailanganin mong mangalap ng impormasyong nakuha mula sa mga kultura, mga pagsubok sa pangulay at pagmamasid sa mga form. Kung sinusuri mo ang mga halimbawa ng isang pasyente, ang mga sintomas na naroroon ay maaari ring makatulong na matukoy ang uri ng bakterya na angkop.
   • Halimbawa, kung ang mga pagsusuri ay nagpapakita na ang bakterya ay negatibo ng gramo, anaerobic, non-motile at napansin mo ang mga sintomas tulad ng sakit sa tiyan, pagduduwal at pagsusuka sa pasyente, malamang na ang pasyente ay naghihirap mula sa impeksyon sa Bacteroides. fragilis.
2. Kumunsulta sa isang database. Mayroong libu-libong mga species ng bakterya sa mundo. Imposibleng malaman ang lahat sa pamamagitan ng puso. Marahil ay kailangan mong kumunsulta sa isang klinikal na microbiology book o online database upang ihambing ang mga resulta ng pagsubok sa impormasyon tungkol sa mga species ng bakterya.
   • Mayroong mahusay na mga mapagkukunan sa online para sa pagkilala sa bakterya, ngunit ang karamihan sa mga database na ito ay magagamit sa Ingles, kasama ang Patricbrc.org at GlobalRPh. Gayunpaman, maaari ka pa ring makahanap ng kapaki-pakinabang na impormasyon sa website ng INRA International Microbial Resource Center.
3. Gumawa ng isang pagsubok sa genetic upang malaman ang eksaktong mga species ng bakterya. Sa ilang mga kaso, maaaring kailanganin mong makilala ang mga species ng bakterya. Ang pinakamabilis at pinakamadaling pamamaraan ay upang magsagawa ng isang pagsubok sa DNA. Ang mga pagsusuri sa DNA ay kapaki-pakinabang din para sa pagkilala sa mga bakterya na lumalaban sa tradisyonal na anyo ng paglamlam at kultura. Sa ngayon, ang mga pagsusuri sa DNA sa mga microorganism ay napakabilis at maaaring maging handa sa mas mababa sa dalawang oras.
   • Kung wala kang access sa isang laboratoryo na nagsasagawa ng genetic na pagkakasunud-sunod ng mga microorganism, magpadala ng isang sample ng bakterya sa isang dalubhasang ahensya.